Тестването на PCR (полимеразна верижна реакция) е основна технология в молекулярната диагностика. Стандартизацията на неговите процеси за опаковане и тестване пряко влияе върху точността и биологичната безопасност на резултатите. Тази статия предоставя професионална перспектива за ключовите точки за контрол на качеството през целия процес на тестване на PCR.
Примерната получаване и предварителната обработка са първите стъпки в процеса. Лабораториите трябва стриктно да проверяват идентифицирането на извадката, условията на транспортиране и времето за съхранение, за да гарантират целостта на извадката. При получаване пробите трябва да бъдат номерирани и регистрирани в кабинет за биологична безопасност и да се подлагат на процедури за обработка на PRE - като лизис и екстракция на нуклеинова киселина въз основа на типа тест. По време на този етап е необходима две - система за проверка на човека, за да се предотврати кръстосаното замърсяване -.
PCR реакционната система трябва да се извърши в чиста пейка. Операторите трябва да носят защитно оборудване от ниво 3 и да използват Nuclease - безплатни консумативи. Подготовката на реагенти се придържа към принципа на „еднопосочен работен поток“, преминавайки от зоната за подготовка на реагенти към зоната за обработка на пробата и след това към областта на усилване. Отрицателните контроли, положителните контроли и вътрешните контроли трябва да бъдат включени във всяка реакционна партида, за да се наблюдава експерименталната валидност.
По време на фазата на амплификация и тестване, PCR инструментът трябва да бъде предварително - калибриран и температурен параметри за циклично циклиране. Реакционната процедура обикновено включва три етапа: денатурация (94 - 95 градуса), отгряване (50-65 градуса) и удължаване (72 градуса). Броят на циклите се регулира въз основа на целта за откриване. Флуоресцентната PCR в реално време също изисква мониторинг на прага на флуоресцентен сигнал на специфични канали.
Анализът и отчитането на резултатите трябва да се извършват от квалифицирани техници. Суровите данни трябва да бъдат прегледани от поне двама професионалисти, за да потвърдят морфологията на кривата на усилване, правдоподобността на стойността на КТ и спазването на материалите за контрол на качеството със стандартите. Окончателният доклад трябва да включва информация за методологията на теста, основата за интерпретация на резултатите и декларация за ограничения на теста.
Целият процес стриктно се придържа към ISO 15189 и съответните спецификации на CDC. Прилага се тройна гаранционна система за мониторинг на околната среда, поддръжка на оборудване и обучение на персонала, за да се гарантира надеждността и проследяването на PCR тестването.